Die Vorbereitung von Proben für die REM-Analyse (Rasterelektronenmikroskopie) umfasst mehrere wichtige Schritte, um sicherzustellen, dass die Probe ordnungsgemäß konserviert und für eine detaillierte Bildgebung bereit ist.
7 wesentliche Schritte, die zu beachten sind
1. Primäre Fixierung mit Aldehyden
In diesem Schritt werden die Proteine in der Probe mit Aldehyden fixiert. Aldehyde tragen dazu bei, die Struktur der Proteine zu erhalten und ihren Abbau zu verhindern.
2. Sekundäre Fixierung mit Osmiumtetroxid
Nach der Primärfixierung wird die Probe einer Sekundärfixierung mit Osmiumtetroxid unterzogen. Dieser Schritt trägt zur Fixierung der Lipide in der Probe bei und sorgt für den Kontrast bei der Bildgebung.
3. Dehydratisierungsreihe mit Lösungsmittel
Die Probe wird dann mit einer Reihe von Lösungsmitteln wie Ethanol oder Aceton dehydriert. Durch die Dehydratisierung wird der Probe Wasser entzogen und sie wird für die Trocknung vorbereitet.
4. Trocknen
Sobald die Probe entwässert ist, muss sie getrocknet werden. Dies kann mit verschiedenen Methoden geschehen, z. B. durch Trocknung am kritischen Punkt, Gefriertrocknung oder einfach durch Lufttrocknung. Ziel ist es, alle Spuren von Lösungsmitteln aus der Probe zu entfernen.
5. Aufziehen auf einen Stumpf
Die getrocknete Probe wird dann auf einen Stub, einen kleinen Metallzylinder oder eine Scheibe, montiert. Der Stummel bietet eine stabile Plattform für die Probe während der Bildgebung.
6. Sputter-Beschichtung mit leitfähigem Material
Um eine Aufladung zu verhindern und die Leitfähigkeit zu verbessern, wird die Probe mit einem Sputter-Beschichter mit einer dünnen Schicht aus leitfähigem Material wie Gold oder Kohlenstoff beschichtet. Diese Beschichtung gewährleistet, dass der Elektronenstrahl während der REM-Analyse ordnungsgemäß mit der Probe interagieren kann.
7. Richtlinien des Geräteherstellers beachten
Es ist wichtig zu beachten, dass die spezifischen Probenvorbereitungstechniken je nach Art der Probe und den spezifischen Anforderungen der REM-Analyse variieren können. Daher ist es wichtig, die Richtlinien und Protokolle des Geräteherstellers für die Probenvorbereitung zu konsultieren.
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