Die Temperatur, bei der ein Rotovap betrieben werden sollte, liegt in der Regel bei etwa 50 °C, insbesondere wenn er in Verbindung mit einem Tiefvakuum verwendet wird. Diese Temperatureinstellung ist entscheidend für eine effiziente Verdampfung, ohne die Probe zu beschädigen, insbesondere wenn es sich um empfindliche Komponenten wie Peptide oder Proteine handelt.
Erläuterung der Temperatureinstellung:
Die Wahl von 50 °C ist von strategischer Bedeutung, da sie ein Gleichgewicht zwischen dem Bedarf an ausreichender Wärme zur Erleichterung der Verdampfung und der Notwendigkeit, eine Überhitzung empfindlicher Materialien zu vermeiden, herstellt. Unter einem tiefen Vakuum ist der Siedepunkt von Lösungsmitteln erheblich herabgesetzt, so dass sie bei niedrigeren Temperaturen verdampfen können als unter normalem atmosphärischem Druck. Dies ist besonders wichtig, wenn die Probe empfindliche biologische Moleküle enthält, die bei höheren Temperaturen denaturieren oder abgebaut werden können.Die Rolle des Vakuums:
- Das tiefe Vakuum ist wichtig, um den Siedepunkt von Lösungsmitteln zu senken, was wiederum den Betrieb bei niedrigeren Temperaturen ermöglicht. Herkömmliche Vakuumquellen wie peristaltische Pumpen oder Aspiratoren sind für diesen Zweck unzureichend, da sie die für einen effektiven Rotovap-Betrieb erforderlichen niedrigen Drücke (im mTorr-Bereich) nicht erreichen können. Es wird daher eine robuste Vakuumpumpe empfohlen, die diese niedrigen Drücke erreichen kann.Arbeitsschritte:
- Vakuumpumpe starten: Starten Sie zunächst die Vakuumpumpe und lassen Sie sie einige Minuten lang anziehen, bevor Sie die Probe injizieren. Dieser anfängliche Vakuumaufbau stellt sicher, dass das System einsatzbereit ist.
- Rotovap vorbereiten: Sobald das Vakuum stabil ist und einen niedrigen Wert anzeigt, injizieren Sie ein kleines Volumen (20% der Gesamtmenge) der Flüssigkeit in das Rotovap-Ventil. Der Verdampfungsprozess beginnt, wenn die Temperatur des Kühlers leicht ansteigt.
Injektion einstellen: Beobachten Sie die Temperatur; sobald sie sich stabilisiert oder zu sinken beginnt, öffnen Sie langsam das Einspritzventil, um mehr Flüssigkeit in den Rotationskolben einzuleiten. Ziel ist es, die Ein- und Ausstoßraten anzugleichen, um einen gleichmäßigen Prozess aufrechtzuerhalten.
Schlussfolgerung:
